基因工程实验连接-基因工程实验操作包括哪几个步骤

今天给大家分享基因工程实验连接，其中也会对基因工程实验操作包括哪几个步骤的内容是什么进行解释。

文章信息一览：

• 1、基因工程中怎样把两段目的基因连接起来
• 2、基因工程如何判断那两个片段能连接

基因工程中怎样把两段目的基因连接起来

目的基因也可以与质粒反向连接（反向连接），即目的基因的上下游方向颠倒地与载体相连，结果目的基因的转录从下游到上游，导致密码子全部改变，目的基因不能正常表达。为了防止出现反连现象，实验中常用双酶切的方法。

至于怎么切割怎么连，下面已经说的很清楚了，简说，就是识别-切割-连接。

DNA连接酶：主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键，起连接作用，在基因工程中起作用。DNA聚合酶：主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，在DNA***中起做用。

基因工程如何判断那两个片段能连接

两点测验：先用3次杂交，再用3次测交（隐性纯合亲本）来分别测定两对基因间是否连锁，然后再根据其交换值确定它们在同一染色体上的位置。

DNA黏性末端可以互补配对的判别方法其实很简单：只要两个黏性末端较长那条链多出来的碱基可以按顺序完全互补配对即可。

把两个目的片段PCR扩增出来，或许两头都还要酶切一下，以形成互补的粘性末端。PCR时注意所用种类的热聚合酶是否在产物末端添加A，酌情处理。

不同限制性内切酶切割的DNA片段可能会产生不同的粘性末端，但是只要这些粘性末端是互补的，就可以通过连接酶将它们连接在一起。这种方法被广泛应用于DNA重组和基因工程中，例如将外源DNA片段插入到质粒中以构建重组质粒。

当目标DNA片段镶嵌到质粒中时，X端与M端就配对成双连，这样就形成了完整的新的又能被ECORI酶切割的一段序列。再加上质粒本身就有没有被破坏的PSTI酶可以切割的序列。

同一种酶切的末端可以相连接在一起，如果质粒的左端和目的基因的左端用同一种酶切，二者的右端用另一种相同的酶切，那么就可以实现定向连接了。

关于基因工程实验连接，以及基因工程实验操作包括哪几个步骤的相关信息分享结束，感谢你的耐心阅读，希望对你有所帮助。