蛋白质序列测定方法-蛋白质序列测序
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核酸和蛋白质序列分析的内容和方法有哪些
蛋白质序列分析 利用生物信息学工具和数据库（例如NCBI、UniProt）获取蛋白质的氨基酸序列。进行序列比对，发现序列的保守区域或者特异性，通过多序列比对来分析蛋白质家族内的相关性。
生物信息学的研究重点主要体现在基因组学和蛋白质学两方面，具体地说就是从核酸和蛋白质序列出发， 分析序列中表达结构和功能的生物信息 。
ESI-MS从液相中产生离子，一般说来，肽段的混合物经过液相色谱分离后，经过偶联的与在线连接的离子阱质谱分析，给出肽片段的精确的氨基酸序列，但是 分析时间一般较长。
测定未知蛋白质或者DNA的序列一般都可以用三种方法：生物方法、化学方法和物理方法。生物学方法——酶解，一般和化学方法结合使用。
其一，如果对核酸序列进行分析，并且是CDS编码区的核酸序列，一般需要将核酸序列分别先翻译成氨基酸序列，进行比对，然后再对应到核酸序列上。这一流程可以通过MEGA 0以后的版本实现。
这就需要分析大量的数据，从中找出蛋白质序列和结构之间存在的关系与规律。
蛋白质的N末端测定
N-末端测定 A.二硝基氟苯法（FDNB，DNFB）：1945年Sanger提出此方法，是他的重要贡献之一。DNP-氨基酸用有机溶剂抽提后，通过层析位置可鉴定它是何种氨基酸。
通过蛋白质与DNS-Cl（二硝基硫脲氯化物）反应，生成DNS-蛋白质。DNS-蛋白质是通过在N-末端氨基酸残基上标记DNS（二硝基萘基）基团而得到的。对DNS-蛋白质进行水解和薄层层析，可以确定该蛋白质中所含的氨基酸种类和数量。
测定蛋白质分子中多肽链的数目。通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。3 二硫键的断裂。
蛋白质测序方法
1、目前对蛋白N端测序主要分类两大类，其一为非质谱技术，例如经典的Edman降解法、利用反转录RT-PCR得到对应蛋白的cDNA，再来反推得到蛋白序列；其二为质谱技术。
2、所以测大的蛋白质的序列时，需要用化学试剂将蛋白质降解为一些肽段。即需要水解。水解时一般用三氟乙酸进行酸水解。酸水解就是加热酸进行水解，而碱水解就是加入碱进行水解。蛋白质一般用酸水解。而酯类则两种水解方式都常用。
3、Eadam降解法是一种化学法对蛋白质进行测序的方法，是从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。
4、iCLIP技术是一种用于表征RNA结合蛋白与RNA交互作用的高通量测序方法。能够以亚单核苷酸分辨率定义RNA和蛋白质交互位点。
5、MS质谱分析：质谱是一种广泛应用于蛋白质鉴定的技术。通过将样品中的蛋白质分子离子化，并根据其质荷比进行分析，可以确定蛋白质分子的质量和结构。
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