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蛋白质跑胶结果-蛋白跑胶怎么看哪个是我的条带

蛋白质工程 3周前 (04-27) 8

文章阐述了关于蛋白质跑胶结果，以及蛋白跑胶怎么看哪个是我的条带的信息，欢迎批评指正。

文章信息一览：

1、目的蛋白纯化浓缩之后，目的蛋白条带周围出现杂带，据推测可能是插入目的基因后，外源基因的表达***大肠杆菌产生了宿主蛋白酶，对异源蛋白进行降解的产物。样品缓冲液有相同的 pH 和离子强度。

2、上样缓冲液混合后进行变性，温度必须要超过95°，时间5—10min，如果没把握，可以处理10min。

（图片来源网络，侵删）

3、凝胶的配置要注意pH值和混合均匀，如果胶不均匀，也会影响条带。从你后面的描述中，感觉你的电泳缓冲液可能有问题（缓冲能力不够）。跑胶的时间太长了，我一般跑胶2~5小时。查查电泳缓冲液的pH值。

4、跑电泳时看不到结果可能有以下原因：样品问题：样品可能没有充分提取或者制备过程中出现了问题，导致无法在电泳中显示出条带。

SDS与蛋白质的结合按质量成比例（即：4gSDS/g蛋白质），如果比例不当，就不能得到准确的数据。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。

（图片来源网络，侵删）

蛋白鉴定和分析：通过蛋白质电泳、质谱和免疫印迹等技术，对纯化后的蛋白进行鉴定和分析。这些分析可以确定蛋白的分子量、纯度和特定结构域等信息。蛋白应用：将纯化的目标蛋白用于进一步的生物学研究、药物开发或工业应用等领域。

目前有大量软件可以用于分析电泳结果，比较有名的比如BandScan、BandLeader、Sigma Gel等等。今天要向大家介绍的是来自Bio-Rad的1D凝胶定量软件Quantity One（Bio-Rad还有一个做2D凝胶分析的软件PDQuest）。

在SDS-PAGE中，分离胶和浓缩胶中tris-Hcl的pH值不同，主要是因为它们的作用和配方不同。分离胶的主要作用是分离蛋白质，它的配方中含有更高浓度的Tris-Hcl，pH范围在9左右。

SDS-PAGE又叫做SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，其作用具体如下：由于SDS PAGE可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度。

SDS-PAGE电泳的原理及浓缩胶浓缩样品的原理（甘氨酸的作用）SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术。下面就SDS-PAGE的基本原理做简单介绍。

两个相互作用的蛋白用SDS-PAGE电泳时会被分开的，如果分子量差距大的话就是两条带，如果分子量差距很小，考虑到胶分辨率的问题可能会是一条带。

那么就可能是取样有问题如果MK都都没有跑出来，那么胶可能也有问题所以最好是能把SDS-PAGE发上来看看，方便的话最好能把你的结合缓冲液，裂解缓冲液（如果是分泌蛋白的话就是样品处理）一起说明一下。

SDS是一种阴离子除垢剂，可以在不开二硫键的情况下分离寡聚蛋白的不同亚基。如果想让二硫键打开，必须用2－巯基乙醇或过氧酸来处理它。

如果胶浓度偏高，可能跑不动，如果胶浓度偏低，可能跑得太快，分不开。可以查到核酸分子大小与琼脂糖浓度范围的对应关系。

跑胶浓度和片段大小：片段越长跑的越慢，因此不同长度的链就被分开了。琼脂糖以及TAE的量的多少，首先与跑得样品的个数有关，因为样品的个数决定了胶槽的体积，胶槽的体积决定了你的TAE的量，决定了琼脂糖的量。

离子浓度对跑胶的影响：缓冲液中的离子浓度对跑胶的迁移速度和分离效果有很大的影响。低离子浓度下，蛋白质的迁移速度较慢，但分离效果相对较好。高离子浓度下，蛋白质迁移速度较快，但分离效果可能会变差。

浓度低了点就跑的时间短点，当然这个浓度也会影响不同分子大小条带的涌动速度，而你提前确定的浓度只是一个合适跑你检测的分子而已，所以这个浓度左右的胶对你的实验影响很少，别太在乎了。

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