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提纯蛋白质的方法-提纯蛋白质时常用的沉淀方法有哪些

蛋白质工程 2周前 (04-30) 7

接下来为大家讲解提纯蛋白质的方法，以及提纯蛋白质时常用的沉淀方法有哪些涉及的相关信息，愿对你有所帮助。

文章信息一览：

根据性质：蛋白质的两性解离。作用机制：阳离子交换剂在pH0时，带有稳定的负电荷，可与蛋白质的阳离子结合。阴离子交换剂在pH0时，带有稳定的正电荷，可与蛋白质的阴离子结合。

蛋白质的分离纯化方法有：沉淀，电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。

（图片来源网络，侵删）

盐析法：盐析法是一种常用的蛋白质分离方法，原理是向蛋白质溶液中加入高浓度的盐溶液，使蛋白质的溶解度降低，从而从溶液中析出。常用的盐析剂有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。

盐析法：利用不同蛋白质对盐浓度的敏感性差异，通过逐渐加入盐类使蛋白质沉淀析出，再通过离心去除沉淀物。盐析法：根据蛋白质分子大小的差异，利用凝胶过滤介质的孔隙大小将蛋白质分子从溶液中分离出来。

（图片来源网络，侵删）

常用的蛋白质纯化方法有离子交换色谱、亲和色谱、电泳、疏水色谱等等离子交换色谱：蛋白质和氨基酸一样会两性解离，所带电荷决定于溶液pH。pH小于pI时蛋白质带正电，pH大于pI时蛋白质带负电。

至今还没的单独或一***成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来，因此往往***取几种方法联合使用。

盐析法原理：盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐，使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出，而与其他成分分离的方法。盐析法主要用于蛋白质的分离纯化。常作盐析的无机盐有硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。

进一步纯化，一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳法，包括区带电泳、等电点聚焦等作为最后的纯化步骤。用于细分级分离的方法一般规模较小，但分辨率很高。

蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤：（一）材料的预处理及细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要***用适当的方法将组织和细胞破碎。

蛋白纯化方法很多，也很复杂，一般程序如下：分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分级、细分级三步。

【答案】：D 本题要点是蛋白质分离纯化的主要方法。蛋白质分离纯化的主要有盐析、透析、超离心、电泳、离子交换层析、分子筛。

蛋白质分离纯化常用方法有：沉淀，电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。

凝胶过滤色谱、离子交换色谱、亲和色谱等均为常规色谱法。HPLC包括反相高效液相色谱（reversed-phase HPLC，RP-HPLC）、离子交换高效液相色谱（ion exchange HPLC）等。根据目标蛋白性质的不同可选用相应的色谱分离技术纯化蛋白质。

③离子交换层析根据性质：蛋白质的两性解离。作用机制：阳离子交换剂在pH0时，带有稳定的负电荷，可与蛋白质的阳离子结合。阴离子交换剂在pH0时，带有稳定的正电荷，可与蛋白质的阴离子结合。

常见的分离提纯蛋白质的方法有：盐析与有机溶剂沉淀：在蛋白质溶液中加入大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质从溶液中沉淀析出，称为盐析。常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。

分离和提纯蛋白质的方法有盐析法、离子交换法、凝胶色谱法。盐析法：盐析法是一种常用的蛋白质分离方法，原理是向蛋白质溶液中加入高浓度的盐溶液，使蛋白质的溶解度降低，从而从溶液中析出。

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