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蛋白质建模测序-蛋白质测序过程

蛋白质工程 3周前 (04-06) 6

接下来为大家讲解蛋白质建模测序，以及蛋白质测序过程涉及的相关信息，愿对你有所帮助。

文章信息一览：

标准管法更容易区分出蛋白质的高低。标准曲线法简介：标准曲线法，也称外标法或直接比较法，是一种简便、快速的定量方法。与分光光度分析中的标准曲线法相似，首先用欲测组分的标准样品绘制标准曲线。

应该是问蛋白质含量测定的方法吧。方法有以下几种：直接测定UV法。凯氏定氮法。双缩脲法。酚试剂法。紫外吸收法。BCA法。Lowry法。考马斯亮蓝法。Bradford法测定试剂盒。

（图片来源网络，侵删）

双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。酚试剂法。

当前，所谓蛋白质测序，主要指的是蛋白质的一级结构的测定。蛋白质的一级结构（Primary structure）包括组成蛋白质的多肽链数目。很多场合多肽和蛋白质可以等同使用。多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。

蛋白质测定的国标规定方法——凯氏定氮法介绍【GB/T 5005—1985】食品中蛋白质的测定方法本标准适用于各类食品中蛋白质的测定。1 原理蛋白质是含氮的有机化合物。

（图片来源网络，侵删）

蛋白质含量测定方法就是检测N元素的含量，像三聚氰胺的问题，就是通过增加N的含量使“蛋白质”含量提高的。国家标准检测蛋白质含量的方法叫做凯氏定氮法，食物中的蛋白质在催化加热条件下分解，导致氨和硫酸结合产生硫酸铵。

1、蛋白质多肽链的氨基酸顺序分析，即蛋白质一级结构的测定，主要包括以下几个步骤：测定蛋白质分子中多肽链的数目。通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。

2、第三，样品处理方式，是简单鉴定还是相对定量或者绝对定量。

3、目前对蛋白N端测序主要分类两大类，其一为非质谱技术，例如经典的Edman降解法、利用反转录RT-PCR得到对应蛋白的cDNA，再来反推得到蛋白序列；其二为质谱技术。

4、现在比较简单的方法是质谱法，而且测一个样品价格也不高。具体价格各个实验室不一样，100-500元吧。如果质谱法不能确定的话还可以结合N端测序，可测10几个氨基酸。

蛋白质N端测序的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。

另外核磁共振也有使用，但是由于测定蛋白质分子量受限，不如X-ray使用广泛。DNA的测序也是使用生物学方法和化学方法。

例如N-端序列影响蛋白质的半衰期，同时关联着蛋白亚细胞器定位等，这些与蛋白的功能和稳定***息相关，对蛋白进行N-端测序分析，有利于帮助分析蛋白质的高级结构，揭示蛋白质的生物学功能。

目前对蛋白N端测序主要分类两大类，其一为非质谱技术，例如经典的Edman降解法、利用反转录RT-PCR得到对应蛋白的cDNA，再来反推得到蛋白序列；其二为质谱技术。

二代测序应用：二代测序技术的应用可以概括为基因组测序、转录组测序、甲基化测序、重测序和蛋白质组学。其中，基因组测序可以用来研究遗传学、疾病基因、基因表达、生物多样性和深入研究基因组结构能。

Eadam降解法是一种化学法对蛋白质进行测序的方法，是从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。

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